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PCR儀的一些相關知識介紹

更新時間:2020-11-14      瀏覽次數:1912
  PCR是聚合酶鏈反應的簡稱,是在短時間內體外大量擴增特定的DNA片段的分子生物學技術。自動完成聚合酶鏈反應,提供DNA擴增的溫度條件而設計的儀器稱為PCR儀。
  
  PCR儀主要用于DNA片段的放大,可將DNA分子或某一DNA片段于數小時內擴增至十萬乃至百萬倍,在這過程中主要是3個特征溫度循環:
  
  1、高溫變性:把樣品加熱至90~95℃讓DNA模板變性變成單鏈。
  
  2、低溫退火:讓樣品的溫度迅速下降至50~65℃,引物就可以結合到模板上去。
  
  3、適溫延伸:讓樣品的溫度上升至70~75℃,DNA聚合酶就可以從引物開始用底物復制出新鏈。
  
  因此,在PCR反應過程中對溫度控制的要求很高,良好的溫度控制是PCR儀質量好壞的關鍵。
  
  基因擴增的基本要素:
  
  1、DNA模板:待拷貝的DNA稱為模板,它可以是雙鏈DNA也可是單鏈DNA,Z后擴增得到的產物是雙鏈狀態的。
  
  2、引物:是DNA復制的先鋒,就象結晶過程中的晶核,引導DNA的合成。在PCR擴增中一般使用合成的寡核苷酸作引物。
  
  3、DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶):是DNA復制的動力,在dNTP等底物存在時在引物的引導下沿著模板DNA合成互補的DNA鏈。
  
  4、緩沖液:提供DNA合成反應所需的pH,離子強度等環境。
  
  5、4種單核苷酸:dNTP,提供DNA合成原料。
  
  PCR儀用途:
  
  1、醫學和健康檢驗機構臨床診斷,用于判斷檢體中是否會表現某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷以及基因復制。
  
  2、DNA鑒定,常見于司法鑒定領域。
  
  3、臨床分子診斷試劑和生物試劑公司藥品研發。
  
  4、轉基因、微生物、動物源性成分檢測,常見于醫藥衛生及農產品檢驗領域。
  
  2、引物:是DNA復制的先鋒,就象結晶過程中的晶核,引導DNA的合成。在PCR擴增中一般使用合成的寡核苷酸作引物。
  
  3、DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶):是DNA復制的動力,在dNTP等底物存在時在引物的引導下沿著模板DNA合成互補的DNA鏈。
  
  4、緩沖液:提供DNA合成反應所需的pH,離子強度等環境。
  
  5、4種單核苷酸:dNTP,提供DNA合成原料。

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