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熒光定量PCR儀選購的四個要點

更新時間:2015-11-17      瀏覽次數:2627

  1、運行速度
  
  在熒光定量PCR儀的眾多技術參數中,升降溫速度也是廠家喜歡大力宣傳的指標。更快的升降溫,可以縮短反應進行的時間,而且縮短了可能的非特異性結合、反應的時間,提高PCR的特異性。為了更好的完成實驗,各個廠家紛紛推出能快速運行的熒光定量PCR儀。例如ROCHE推出的Lightcycler2.0利用空氣動力學原理,可在半小時左右完成30-40個循環。ABI的7500可以選配FAST模塊擁有5°C/秒的升降溫速度,可在40分鐘左右完成30-40個循環。zui近eppendorf新推出的Mastercyclereprealplex4S和2S的銀質模塊熒光定量PCR儀,升降溫的速度可達到6℃/秒和4.5/秒,是目前同類產品中升降溫速度zui快的熒光定量PCR儀。一個在其他儀器上原本需要40—60分鐘的PCR反應,eppendorfMastercyclereprealplex4S和2S(銀質模塊)只需運行28分鐘——別小看這節約下來的幾十分鐘,一天下來就可以多運行好幾輪了。
  
  2、靈活性
  
  大規模繁忙的實驗室設備固然讓人羨慕,但是常規實驗室同樣可以有精彩的選擇?,F在的儀器供應商擁有眾多技術專家,有的還能提供整個分子生物學的基礎研究平臺,不但了解、滿足您現在的需求,而且還考慮到了你可能變化的需求——升級和更換模塊。Bio-rad的Mycycler就可以選擇模塊升級為定量PCR儀。ABI的7900可以選擇將96孔槽變為384孔槽。像離心式的雙通道的Rotor-gene3000A
  
  就可以根據您研究的需要升級成四通道的熒光定量PCR儀。Eppendorf公司在這方面考慮的就更加周全,如實驗室已經擁有Mastercyclerep可以按照您的要求升級為Mastercyclereprealplex熒光定量PCR儀,而且可升級的型號有4種:2通道銀質、鋁制模塊和4通道銀質、鋁制模塊。您可以根據自己的經費和實驗需要購買、升級任何一款Mastercyclereprealplex熒光定量PCR儀。
  
  3、儀器的檢測通量
  
  在購買定量PCR儀的時候要根據實驗實的需要來選擇不同通量的儀器。目前市面上的熒光定量PCR的檢測通量小到16個多到384個。如果進行一般的基因表達研究或病原體檢測,實在不必購買昂貴的儀器,96孔的通量足夠用;需要尋找要新藥靶點和疾病標記的實驗室可以考慮購買384孔板的儀器。假如經費有限無法購買384孔板儀器的實驗室,可以考慮購買運行速度快(帶有FAST模塊)的96孔板熒光定量PCR儀。
  
  4、硬件設計特點
  
  熒光定量PCR儀主要有傳統的96孔板式、創新的離心式等,每種設計都有它的獨到之處但也都有無法避免的缺憾。
  
  傳統的96孔板的熒光定量PCR可以容納的樣本量大,而且無需特殊的耗材。有些傳統的96孔板的儀器采用鹵鎢燈激發、CCD檢測,這些光學結構在96孔板的頂部,每個樣品孔距光源和檢測器的光程各不相同——邊緣效應,對結果產生影響。為了保證、準確的實驗結果,這類儀器在實驗過程中通常會使用ROX(一種熒光染料)或的Referencedye作為參照校正實驗結果。鹵鎢燈的使用壽命短、更換成本較高已經成為很多用戶頭痛的問題。在實驗過程中鹵鎢燈作為一種熱光源,產生較多熱能對實驗結果有一定的影響。CCDzui大的優點就是可以同時掃描所有樣品中的熒光信號,但是靈敏度較低,而且同時檢測樣品間的熒光信號存在干擾。像ABI、Bio-rad公司生產的熒光定量PCR就屬于這一種。但Bio-rad的IQ系列熒光定量PCR帶有梯度功能。
  
  創新的離心式的儀器通常選用LED激發、PMT檢測,離心式的設計上避免了邊緣效應。LED光源是冷光源對實驗沒有影響,因此無需采用其他熒光染料校正儀器,而且使用壽命長無需經常更換。PMT每次只能收集單個熒光信號,但是檢測靈敏度高。但這類儀器運行速度非???,但也存在樣本量小、耗材昂貴、沒有梯度功能、存在時間積分等缺點。Corbett的Rotor-gene系列和Roche的Lightcycler系列均為這一類儀器。
  
  隨著熒光定量PCR技術的使用,聰明的儀器生產商紛紛在傳統的96孔板儀器上大作改進。首先是Stratagene的Mx3000p在檢測上突破了使用CCD改用PMT檢測熒光信號,大大提高了實驗的靈敏度,但激發光源仍然沿用傳統的鹵鎢燈并且沒有梯度功能。Eppendorf公司推出的Mastercyclereprealplex是一款帶有梯度功能的熒光定量PCR儀,使用了96個LED為激發光源,采用先進的CPM(第二代PMT)及96合一光纖為檢測系統,不但避免了邊緣效應還保證所有樣品間的熒光信號沒有干擾。
  
  

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